尊龙凯时提供的慢病毒感染技术能够有效感染分裂和非分裂细胞,并将外源基因整合到宿主染色体上,实现持久表达,且不易引发免疫反应。这使得慢病毒成为“细胞实验佳选、体内实验必备”的理想工具,广泛应用于遗传性和后天性疾病的治疗。从基础研究到临床应用,高纯度、高滴度的慢病毒是基因操作的理想选择。
然而,由于实验中使用的细胞类型不同,慢病毒的感染效率可能存在差异。为了提高慢病毒的感染效率,合理的实验步骤和最佳实验条件至关重要。以“24孔培养板、贴壁细胞”为例,慢病毒感染细胞的常规操作步骤如下:
实验步骤
Day 0:接种细胞 - 每孔接种5×105个待感染细胞,使用含10% FBS的DMEM培养基培养。
Day 1:细胞感染 - 感染前,按照说明用完全培养基配置感染液,吸掉旧培养基后更换为感染液。参照细胞MOI值计算病毒使用量,加入病毒进行感染并充分混匀。
Day 2:更换培养基 - 病毒感染8-16小时后,换回常规培养基,继续培养细胞。
Day 3-4:确认感染效果 - 感染72小时后,使用显微镜观察EGFP及Cherry表达情况,以评估感染效果。
关键指标:MOI
在慢病毒感染过程中,MOI(复感染指数)是个非常重要的指标。MOI越高,细胞被感染的难度越大。通常将80%细胞被感染时所用的病毒颗粒数与细胞数量的比值定义为该株细胞的MOI,计算公式为:
感染条件的选择原则
选择感染条件时应遵循以下原则:
- 在细胞形态不受影响的情况下,尽量使用较少的病毒感染细胞。
- 选择感染效率在80%左右的条件作为最佳感染方案。
通过对细胞感染的预实验,您可以确定慢病毒对细胞的最佳感染条件,从而精准设定细胞的MOI,保证后续正式实验的成功率。借助尊龙凯时的技术支持,您的实验将更加高效。