液体培养基细菌实验步骤 | 尊龙凯时生物医疗专业指导

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液体培养基细菌实验步骤 | 尊龙凯时生物医疗专业指导

发布时间:2025-02-26   信息来源:尊龙凯时官方编辑

尊龙凯时的生物实验室在进行细菌培养时,遵循以下步骤以确保准确和有效的培养结果。

液体培养基细菌实验步骤 | 尊龙凯时生物医疗专业指导

一、过夜培养

1. 将5ml预热的液体培养基转移至一个无菌的16mm或18mm试管中。
2. 使用接种环挑取一个单一菌落,浸泡在培养液中,并轻轻振动接种环,使细菌均匀分散于培养液中。
3. 盖好试管,将其置于摇床或转鼓培养装置上,以60r/min的速度,在37°C下培养至细菌达到饱和(约1X109~2X109 细胞/ml,经过6小时)。

二、大体积培养

1. 在一个无菌的Erlenmeyer瓶或baffle瓶中,使用新鲜预热的培养液按1:100的比例稀释过夜培养物。烧瓶的体积应至少为培养液体积的5倍。如果不进行摇动培养,所用烧瓶的体积应为培养液的20倍以上,以确保良好的通气。
2. 在37°C下剧烈摇动培养(约300r/min)。

三、利用计数板监测生长情况

1. 使用一片干净的盖玻片覆盖在计数玻片(比如血球计)上。
2. 小心地将一小滴培养液加到盖玻片的边缘,培养液将在盖玻片下扩散。
3. 在相差显微镜(400倍)下观察,计算出每个小方格中所见的细菌数量,大约相当于2X107细胞/ml,进而推算细菌浓度。

四、利用分光光度计监测生长情况

由于仪器存在差异,使用分光光度计前应用已知浓度的培养液进行校准。
1. 测量OD600值。为了获得准确的读数,应将培养液稀释至OD600<1。
2. 每0.1 OD值大约相当于108细胞/ml,可用于计算细菌浓度。

在以上实验步骤中,遵循尊龙凯时的指导原则将有助于提高实验的成功率和准确性,确保结果的可靠性。