多克隆抗体（polyclonal antibody, pAb）是通过免疫动物以一种包含多种抗原决定簇的抗原来刺激多个B细胞克隆，从而产生多种针对不同抗原表位的抗体。所获得的免疫血清实际上是多个抗体的混合物，即多克隆抗体。与之相对应的是单克隆抗体，它是由单一B细胞克隆产生的，针对某一特定抗原表位且高度均一的抗体，通常采用杂交瘤技术进行制备。该技术通过细胞融合，将具备特异性抗体分泌能力的致敏B细胞与具有无限繁殖能力的骨髓瘤细胞融合，形成B细胞杂交瘤。

一、单抗与多抗的优缺点

多克隆抗体的优点

1. 多克隆抗体能够放大低表达水平的靶蛋白信号；

2. 识别多个表位；

3. 相比单克隆抗体，更能适应抗原中的微小变化；

4. 可以识别与免疫原蛋白具有高同源性的蛋白质，或从非免疫原物种的组织样本中筛选靶蛋白；

5. 通常是检测变性蛋白质的首选；

6. 多表位通常提供更为强有力的检测。

多克隆抗体的缺点

1. 易产生批次间差异；

2. 可能产生大量非特异性抗体，有时会在某些应用中引起背景信号；

3. 不适合检测抗原的特定结构域，因为抗血清通常会识别多个结构域。

单克隆抗体的优点

1. 杂交瘤制得后，成为恒定的再生源，所有批次均相同；

2. 切片和细胞染色造成的背景较低；

3. 特异性强，适宜用于分析测定中的一抗或检测组织中的抗原，通常产生的背景染色显著低；

4. 同质性极高；

5. 特异性使单克隆抗体在混合物中能够高效结合抗原。

单克隆抗体的缺点

1. 可能产生大量特异性抗体，但特异性过强；

2. 经化学处理后，比多克隆抗体更易于丢失表位，可以通过使用同一抗原的多个单克隆抗体进行补偿。

二、单抗与多抗的选择

当对抗体的特异性要求较高，使用量较大，或需要长期一致的抗体，并且应用需求多样（如WB/IP/IF/ICC等）时，建议选择制备单克隆抗体。若对抗体的特异性要求不高，且主要进行沉淀和凝集等检测性实验，或者仅进行ELISA检测，则可以选择制备多克隆抗体。

多克隆抗体相较于单克隆抗体仍具有制备时间短、首次制备成本低的特点，在某些情况下是合理的选择。同时，在相同条件下，使用多克隆抗体可以提高检测灵敏度，对于丰度较低的蛋白也更容易检出。

三、抗原的选择

抗原的选择可以是天然蛋白、重组可溶蛋白、重组变性蛋白和多肽等，抗原质量越高，最终制备高质量抗体的几率也越大。目前，抗体制备常采用重组蛋白或多肽作为抗原。

重组蛋白作为抗原通常含有更多抗原决定簇，既有空间表位，也包括线性序列表位，从而对机体产生更充分的免疫刺激，因此获取应用面较广的抗体几率更大。特别是当目标蛋白已被证明具有修饰或复杂结构时，通常优先选择重组蛋白。

当然，对于同源家族中的某个特定蛋白抗体的制备，可能需要使用合成特异性氨基酸的多肽。此外，某些修饰抗体也需要在多肽合成阶段进行定点修饰，以制备目标抗体。

在选择抗原多肽时，通常遵循以下基本原则：尽量选取位于蛋白表面的序列；避免形成α-helix；优先考虑N、C端的肽段而非中间部分；避免蛋白内重复或接近重复的序列；避免选择同源性过高的肽段；交联应在不关键的一端；避免过多的脯氨酸（Pro），但一两个Pro有助于保持肽链的稳定性，从而有利于产生特异性抗体。

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