在miRNA研究领域，验证miRNA与基因之间的靶向关系是一个常见的主题。miRNA通过其种子序列（5’端第2-8个碱基）与mRNA的3’UTR区域结合，进而诱导细胞内沉默复合体介导的mRNA降解或抑制mRNA翻译。这一基本原理支撑了我们的研究方法：将目标基因的3'UTR区域（或结合位点下游500bp）插入荧光素酶报告基因载体（如PGL3-CMV-LUC-MCS），与miRNAmimics共同转染至目标细胞中。通过添加底物，我们能够检测荧光素酶活性的变化。如果荧光素酶活性下调，这表明该miRNA与靶基因的3'UTR区域存在相互作用。

双荧光素酶报告基因检测用于验证miRNA与靶基因3'UTR的相互作用，其实验原理主要包括以下几个步骤：首先利用生物信息学分析软件（如TargetScan、StarBase和miRanda等）预测miRNA靶基因的3'-UTR区域序列中是否存在miRNA结合位点。接下来，将预测出的miRNA结合靶基因的3'-UTR序列插入到荧光素酶（Firefly luciferase）的载体中。当miRNA结合质粒中的插入序列时，它会抑制萤火虫荧光素酶的翻译，导致荧光值降低。通过这一途径，双荧光素酶报告基因检测为揭示miRNA的功能及其调控网络提供了重要工具。

在进行双荧光素酶报告基因检测服务时，我们将遵循详细的实验步骤。首先，需要准备细胞，如HEK293细胞或其他指定的目的细胞。转染试剂可选择HieffTrans®invitrosiRNA/miRNATransfectionReagent。报告基因检测则可以使用DualLuciferaseReporterGeneAssayKit进行。实验设备包括酶标仪、细胞培养板等。

当在目标细胞中进行验证实验时，需确认质粒转染效率，确保其在40%以上，以验证预实验的成功。实验步骤包括利用0.25%胰酶消化培养的细胞，并将其培养成单细胞悬液，然后接种于24孔培养板中。经过过夜培养，待细胞覆盖率达到约70%时，进行转染实验。在转染前，将培养基更换为新鲜培养基，随后按照转染试剂说明书进行操作。转染48小时后，收集靶细胞，并使用Passive Lysis Buffer进行细胞裂解。

随后，将裂解后的样品经过离心处理，收集上清液进行下步检测。Renilla Luciferase Assay工作液的配制应按照样品需求准备。荧光素酶检测过程中，需要根据仪器说明进行参数设置，测定时间与间隔需保持一致，确保数据的可靠性。常规检测分组应包括多种miRNA与质粒的组合，以便分析其相互作用。

通过这些精细的步骤流程，尊龙凯时的双荧光素酶报告基因检测服务能有效地验证miRNA与靶基因3'UTR之间的相互关系，促进基础研究和药物筛选的进展。

尊龙凯时提供的相关产品包括双荧光素酶报告基因检测试剂盒和多种转染试剂，帮助科研人员在生物医学领域取得更快的成果。