尊龙凯时细胞培养说明书

一、细胞培养条件

细胞名称：细胞生长特性：贴壁生长；冻存条件：无血清冻存液；培养体系：1640 + 10%FBS + 1% P/S + 1%丙酮酸钠 + 1% L-谷氨酰胺。

传代方法：首次建议比例为1:2。传代情况：在2天内换液。备注：使用无菌离心管收集瓶子培养基，作为对照培养。如果对照培养效果不佳，建议直接购买我们的尊龙凯时完全培养基。

二、细胞收到后的处理

收到细胞后，待培养至良好状态，再灌满完全培养液并封好瓶口，这是运输细胞的最佳方法。首先，用75%酒精喷洒整个细胞瓶进行消毒，然后放置于超净工作台内，确保严格无菌操作。将细胞瓶放入37℃、5%CO2的培养箱中静置3-4小时以稳定细胞状态后进行处理。使用显微镜观察细胞生长情况，并保存不同倍数的照片（最好在40x、100x、200x各拍摄一张）。前三天的照片将作为重要的售后依据，未提供照片将默认收到状态良好。在传代后，建议使用一个瓶子加入原瓶的完全培养基，另一个瓶子使用自行配制的完全培养基，以便进行对比培养，换液后需将瓶盖稍微拧松。

三、细胞培养步骤

a、细胞传代

当细胞未超过80%汇合度时，将完全培养液收集至离心管中，保留5ml完全培养基，并放入37℃、5%CO2孵箱培养。如果细胞密度超过80%，可进行传代，具体步骤如下：

1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS冲洗细胞1-2次。
2. 添加约1-2ml的0.25%胰蛋白酶消化液至培养瓶中，置于37℃培养箱消化1-2分钟，然后在显微镜下观察消化情况。若细胞大部分变圆并脱落，迅速返回操作台，轻敲培养瓶后加入5ml以上完全培养基终止消化。
3. 轻轻吹打细胞，使其完全脱落后吸出，将悬液转移至离心管中，在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，加入1-2ml完全培养基重悬。
4. 按1:2的比例进行分瓶传代（两个T25瓶），补充新鲜完全培养基至每瓶5-8ml，最后放入37℃、5%CO2的细胞培养箱中培养。

b、细胞冻存

1. 当细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时，弃去培养液，并用PBS清洗一次。
2. 添加约1ml的0.25%胰蛋白酶消化液至培养瓶中，倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后加入5ml完全培养液以终止消化，轻轻吹打细胞使其脱落，随后将悬液转移至15ml离心管中，1000RPM离心5分钟。
3. 弃去上清，沉淀细胞后加入1ml的尊龙凯时无血清冻存液（货号：C7001），混匀后转移至冻存管中。
4. 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱储存，如后续需转入液氮罐，请提前在-80℃冰箱中存放24小时以上后再进行转移。

四、细胞复苏

从液氮中取出细胞冻存管（请佩戴防护面具），迅速置入37℃水浴中解冻，直至冻存管中无结晶。随后用75%酒精擦拭冻存管外壁，将冻存管中的细胞转移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000RPM离心5分钟，弃去上清，沉淀后用5ml完全培养基重悬，再接种于T25培养瓶，并放入37℃、5%CO2细胞培养箱中继续培养。第二天，换用新鲜的完全培养基继续培养。

注意事项：部分细胞在运输过程中可能会发生脱落，此为正常现象。如脱落较多，可将所有培养液收集至离心管，收集上清以供后续对比培养；沉淀部分可加入胰酶在细胞培养箱中培养。

五、售后条款

1）细胞出现问题的重发条件

1. 细胞在运输过程中遭遇的问题，如丢失、瓶身破损、培养液严重漏液等，予以重发。
2. 如收到的细胞出现污染，请在48小时内向我们提供真实的实验结果，经核实后可予以重发。
3. 常温发货的细胞若静置24小时后，干冰冻存发货的细胞复苏后24小时内绝大多数未存活（需提供真实清晰的细胞状态照片），予以重发。
4. 如干冰冻存发货的细胞在复苏后24小时内，或常温发货细胞未开封静置4小时后出现污染，予以重发。
5. 细胞活性问题请在收到产品7天内反馈真实实验结果，并使用台盼蓝染色法鉴定细胞活力，核实后可重发。
6. 收货当日及第2、3天请保存照片，若超过3天未告知，则视为产品合格。若4-7天内出现问题，需提供前三天的照片及相应操作步骤，由技术人员判断责任，确定是否重发。

2）细胞出现问题不予重发的情况

1. 如因客户造成的细胞污染，将不予重发。
2. 因客户不正确操作导致细胞状态不佳，将不予重发。
3. 因非本库推荐的细胞培养体系导致细胞状态不佳，将不予重发。
4. 若未提供细胞培养前三天的照片，出现细胞状态不良，将不予重发。
5. 细胞培养过程中经其他处理的，将不予重发。
6. 在收到细胞2天内未告知问题，则不予重发。
7. 根据具体情况处理。

我们致力于提供高质量的细胞培养服务，请信赖尊龙凯时，与我们一起推动生命科学的进步！