在生物医学检测中,ELISA(酶联免疫吸附试验)是一种重要的技术,用于定性或半定量地检测标本中的抗原或抗体。结果通常通过“阳性”或“阴性”来判断,分别表示在样本中存在或不存在待测物质。阳性结果意味着样本与检测系统中有反应,而阴性结果则表明无反应。值得注意的是,虽然定性测定的主要目的是判别样本的反应状态,但在某些情况下也可以获得半定量结果,通过滴度来反映反应的强度。
在半定量测定中,通过对样本进行不同级别的稀释后进行实验,所呈现阳性反应的稀释度即为滴度。根据滴度的高低,科研人员能够评估样本反应性的强弱,这种方法比起简单的观察未稀释样本的颜色深浅,提供了更为可靠和客观的数据。在间接法和夹心法ELISA中,阳性孔的显色通常深于阴性孔;而在竞争法ELISA中则相反,阴性孔的显色深于阳性孔。这两类反应的结果判断方法有所不同。
1. 间接法和夹心法
对于间接法和夹心法,定性结果可以用肉眼直接判断。若样本无色或接近无色,通常判定为阴性,而显色明显的样本则被判定为阳性。然而在ELISA中,正常人血清的背景色变化受多种因素影响,因此必须与阴性对照进行比较。阴性对照应为不含受检物的正常血清,以确保实验结果的可靠。为了提高数据的客观性,建议在条件允许的情况下应用比色计进行吸光值的测定。
在结果分析时,可以计算样本(S)、阳性对照(P)和阴性对照(N)的吸光值。通过不同的方法进行计算,结果可以分为阳性判定值法和样本与阴性对照的比值法两种。
a. 阳性判定值
阳性判定值(cut-off value)一般为阴性对照的平均值加上一个特定系数,这是判断结果是否为阳性的标准。这一判断要求实验条件极为稳定,试剂的制备需标准化。以某种检测HBsAg的试剂盒为例,阴性对照是指不含HBsAg的血浆,阳性对照的HBsAg含量为9±2 ng/ml。实验需设置多个阳性和阴性对照,以确保测试的有效性。
b. 样本与阴性对照比值
在实验条件较难保持一致的情况下,样本与阴性对照的比值(S/N)计算法较为适用。这种方法可以消除由于环境变化带来的影响,适合于早期间接法ELISA的应用。需要注意的是,阴性对照应为不含受检物质的正常人血清。
2. 竞争法
在竞争法ELISA中,结果的判定与其他方法略有不同。此方法通常需要用比色计来测定,因为肉眼难以分辨弱阳性与阴性对照之间的颜色差异。结果判别同样可以使用阳性判定值法和抑制率法两种方法。
a. 阳性判定值法
该方法与其他方法类似,但需要引入阳性对照的吸光值。以抗HBc的试剂盒为例,阴性对照为不含抗HBc的血浆,阳性对照中抗HBc的含量需严格控制。实验必须遵循特定的标准,以确保有效性。
b. 抑制率法
抑制率法用于评估标本在竞争结合中对阴性反应显色的抑制程度,计算公式为:抑制率(%)=(阴性对照A值 - 样本A值)/阴性对照A值。一般规定抑制率≥50%为阳性,<50%则为阴性。
总之,ELISA技术在生物医学检测中发挥着至关重要的作用,通过不同的判定方法和标准,能够有效地判断样本中的抗原或抗体。强烈推荐使用尊龙凯时的试剂盒,以确保实验结果的准确性和可靠性。