培养条件：气相为95%的空气加上5%的二氧化碳；培养温度设定为37℃，并加入F12K培养基、10%的胎牛血清和1%的青霉素/链霉素。该细胞系由DJGriad通过肺癌组织移植建立，患者为58岁的白人男性。A549细胞能够通过胞苷二磷酸胆碱途径合成含有高比例不饱和脂肪酸的卵磷脂。传代方法建议为首次传代比例为1:2。

传代步骤：首先，如果细胞的汇合度未超过80%，需将培养瓶中的完全培养液收集至离心管，保留5ml完全培养基并放入37℃、5% CO2的孵箱中继续培养；如果细胞密度超过80%，则可进行传代。对于贴壁细胞的传代步骤，以下步骤为参考：

1. 弃去培养上清，并用不含钙镁的PBS轻轻洗涤细胞1-2次。
2. 向培养瓶中添加约1-2ml的0.25%胰蛋白酶消化液，放入37℃的培养箱中消化1-2分钟，观察细胞变圆并脱落的情况。若细胞脱落，应迅速取回操作台，轻轻敲打培养瓶后加入至少5ml的完全培养基以终止消化。
3. 轻轻吹打以确保细胞完全脱落后，吸出细胞悬液，然后放入15ml离心管中，以1000 RPM离心5分钟，弃去上清，重新加入1-2ml完全培养基并重悬。
4. 按照1:2的比例将细胞悬液分配到两个T25瓶中，添加5-8ml的新鲜完全培养基，最后放入37℃、5% CO2的细胞培养箱继续培养。

悬浮细胞传代可以采用以下步骤：采用半换液法，静置竖立的培养瓶约1小时，轻轻吸去约3ml培养基后补充3ml完全培养基；如果培养基变色较慢，可以增加约500ul的FBS。若需要分瓶，可将细胞悬液收集至离心管中，通过1000 RPM离心5分钟，弃去上清，补加1-2ml培养液后重悬并按1:2比例分瓶培养。

对于细胞冻存，待细胞生长至覆盖培养瓶80%时，弃去培养液并用PBS清洗细胞一次；添加0.25%的胰蛋白酶消化液约1ml，观察细胞变圆后加入5ml完全培养基以终止消化。然后轻轻吹打细胞使其脱落，将细胞悬液转移至15ml离心管，并于1000 RPM下离心5分钟；弃去上清后加入1ml雅吉生物无血清冻存液（货号：C7001），混匀后转移至冻存管中，直接置于-80℃冰箱保存。

复苏细胞时，从液氮中取出冻存管（佩戴防护面具），迅速放入37℃水浴中解冻，直到无结晶后用75%酒精擦拭外壁。将细胞转移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，以1000 RPM离心5分钟，弃去上清后重悬于5ml完全培养基，再接种至T25培养瓶中，放入37℃、5% CO2的细胞培养箱中继续培养。

注意事项：正如尊龙凯时所倡导的，细胞在运输过程中可能会因贴合不牢而脱落，若脱落现象严重，可以将培养液收集到离心管中进行离心处理。请确保在操作过程中遵循无菌操作规程，以最大限度减少细胞损失。