尊龙凯时抗体检测ELISA操作流程概述

### 抗体检测通用ELISA操作流程（效价测定）

尊龙凯时抗体检测ELISA操作流程概述

尊龙凯时提供了一种标准化的ELISA操作流程，以便于抗体效价的测定，具体步骤如下：

#### 1. 包被步骤：

1）使用包被缓冲液配置1-10μg/ml的抗原溶液（建议现配现用）。

2）向高结合力的ELISA板中（货号80112）每孔加入100μl抗原溶液，覆以封板膜，室温轻摇孵育2-6小时，或在4℃下过夜。

3）吸弃溶液，并用洗涤缓冲液洗板2次。

#### 2. 封闭步骤：

1）将封闭缓冲液母液稀释为工作液，每孔加入300μl，室温轻摇孵育2-6小时，或在4℃下过夜。

2）吸弃封闭液并在吸水纸上拍干，板子可立即使用或密封存放于4℃备用。

#### 3. 抗体效价检测：

1）使用抗体稀释液对免疫前和免疫后血清进行梯度稀释（1:100至1:100,000），每孔加入100μl。覆以封板膜，室温轻摇孵育30分钟。

2）吸弃液体，并用洗涤缓冲液洗板5次（每次200-300μl，充分洗涤以避免高背景）。

3）使用抗体稀释液配置HRP标记的抗兔二抗（1:5,000-1:20,000），每孔加入100μl（稀释不当可能导致显色过弱或背景过高）。

4）覆以封板膜，室温轻摇孵育30分钟。

5）吸弃液体，洗板5次后拍干。

6）每孔加入100μl现成的TMB底物溶液。

7）覆以封板膜，室温轻摇孵育至阳性孔出现蓝色（最长不超过15分钟）。

8）每孔加入100μl终止液，使蓝色转为黄色。

9）在450nm波长下读取吸光度。

**注意事项：**

1）该ELISA流程适用于针对纯化抗原（蛋白质或多肽）产生的抗体的定性检测，不适用于血清或其他体液中抗体浓度的定量测定。

2）本流程默认一抗来源于兔，若使用其他宿主动物须选择相应的二抗。

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